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Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测，也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

Hoechst 33258是细胞遗传学研究的常用试剂，荧光染色细胞的DNA，插入DNA的A-T区，具有低的细胞毒性，形成膜渗透性荧光DNA链。用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/ml。因此可配制成10mg/ml的母液于4℃避光保存。

CAS：23491-45-4
分子式：C₂₅H₂₄N₆O·3HCl
分子量：533.88
纯度：≥98%(TLC和HPLC)
外观：黄色或绿色粉末
储存条件：−20℃

注意事项：
1．Hoechst 33258对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
2．荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3．为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法：
1．用PBS或合适的缓冲液制备10～50µM Hoechst 33258染色液。
2．固定的细胞或组织染色：对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。
a)对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
b)吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
c)直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。
3．活细胞或组织染色：
a)细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100μl染色液。
b)在37℃培养细胞10～20分钟。
c)用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
d)直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。
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